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人脐带间充质干细胞原代培养操作记录 | 文件编码: SOP-SC-003-E01 |
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| 工序: 脐带MSC原代细胞培养 | 记录编号 | ||||||||||
| 细胞批号 | 日期 | ||||||||||
| 试剂 | 名称 | 生产厂家 | 批号 | 使用数量 | |||||||
| 磷酸盐缓冲液(PBS) | |||||||||||
| MSC培养基 | |||||||||||
| 青/链霉素(双抗) | |||||||||||
| 75%酒精 | |||||||||||
| 仪器 设备 |
生物安全柜:
XW015
XW022
其他
离心机:
XW016
XW026
其他
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| 脐带组织处理 及干细胞 原代培养 |
1. 组织来源: 接收的脐带物料编码 . 采集时间: 24h内 超过24h; 入库编码: ; 2. 将脐带组织转移至不锈钢碗中; 3. 手术剪裁断脐带, 弃掉结扎部分, 截下一小段留样, 其余部分用清洗液漂洗 次; 4. 取采集瓶中保存液10mL存于4℃冰箱留样, 留样标签应注明脐带条码, 样本类型, 操作人, 操作日期等; 5. 将脐带在不锈钢碗内, 用清洗液漂洗 次, 清洗液无明显血色后, 转入培养皿; 6. 用手术剪将脐带分成2~3cm的小段, 共计 段, 放入装有75%酒精的250mL离心瓶中浸泡30s后用清洗液冲洗干净. 7. 用组织镊将脐动脉和脐静脉内的血丝清理掉并洗净; 8. 由各段脐带组织剥取华通氏胶, 将剥好的华通氏胶放入一个盛有生理盐水的新培养皿内; 9. 用手术剪将华通氏胶剪成2~4mm3大小的组织块, 将剪碎的组织块使用清洗液重悬并200G*5min离心, 取上清存于4℃冰箱待检, 样本标签应注明脐带条码, 样本类型, 操作人, 操作日期等信息; 10. 离心后的组织沉淀共 mL, 接种 个T175, 每个T175培养瓶接种 mL, 接种完成后补加 mL原代细胞培养液. 11. 培养瓶上标记相关信息, 包括细胞来源、操作项目、操作时间、操作人等. 小心将培养瓶放入37℃, 5%CO2的培养箱中培养. |
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| 每个培养瓶上皆清楚标示细胞批号 | 是 否 | ||||||||||
| 清场 | 未使用完试剂是否放入指定位置 | 是 否 | |||||||||
| 废液是否进行收集处理 | 是 否 | ||||||||||
| 是否清洁, 消毒操作间 | 是 否 | 是否清洁, 消毒生物安全柜与移液枪 | 是 否 | ||||||||
| 备注 | |||||||||||
| 操作人/日期: | 复核人/日期: | 主管/日期: | |||||||||