logo NK细胞培养操作记录 文件编码: SOP-SC-014-E01
版 本 号: 01
工序: NK细胞培养 记录编号  
细胞批号   日期  
试剂 名称 生产厂家 批号 使用数量
UBMC/PBMC /    
血替/血浆 /    
NK培养基1 /    
NK培养基2 /    
PBS      
NK营养剂 /    
NK包被剂 /    
仪器
设备

生物安全柜:  XW015  XW022  其他  

离心机:  XW016  XW026  其他  

NK细胞
培养

1. 分离操作记录编号 ; 冻存及复苏操作记录编号 ;

2. 包被:

 Day-1, 将3mL PBS与100μL NK包被剂混匀后加入T25培养瓶中, 平放晃匀. 铺满瓶底后置于4℃包被过夜;

 37℃包被2h;

3. Day 0, 使用10mL PBS轻柔地清洗瓶底并吸出后待用;

4. 接种 *107个细胞;

5. 定容:

 加入血替1mL之后, 用NK培养基1定容至10mL.

 加入自体血浆1mL之后, 用NK培养基1定容至10mL.

做好标记, CO2培养箱中培养.;

6. Day 3,

 向T25培养瓶中加入血替1.5mL后向瓶中加入NK培养基1 13.5mL;

 向T25培养瓶中加入自体血浆1.5mL后向瓶中加入NK培养基1 13.5mL.

轻晃混匀, 避免反复吹打, 做好标记, CO2培养箱中培养;

7. 补液记录:

 PBMC  UBMC NK培养基2
体积		 NK营养剂
体积
 血浆
 血替
体积
 补液前
计数结果		 补液后
总体积		 是否转瓶/袋 操作人/
复核人
Day
 		  mL 90%  mL 5%  mL 5%  *106
/mL		  mL
 转瓶
/ 转袋
 
Day
 		  mL 95%  mL 2.5%  mL 2.5%  *106
/mL		  mL
 转瓶
/ 转袋
 
Day
 		  mL 99%  mL 1% /  *106
/mL		  mL
 转瓶
/ 转袋
 
Day
 		  mL 99.5%  mL 0.5% /  *106
/mL		  mL
 转瓶
/ 转袋
 
Day
 		  mL 99.5%  mL 0.5% /  *106
/mL		  mL
 转瓶
/ 转袋
 
Day
 		  mL 99.5%  mL 0.5% /  *106
/mL		  mL /  
Day
 		 / / / 收获细胞  mL /  

共计收获 *109个细胞, 活率:  ; 直径:  μm.

 
清场 未使用完试剂是否放入指定位置  是  否
废液是否进行收集处理  是  否
是否清洁, 消毒操作间  是  否 是否清洁, 消毒生物安全柜与移液枪  是  否
备注  
操作人/日期: 复核人/日期: 主管/日期: