logo 人脐带间充质干细胞原代培养操作记录 文件编码: SOP-SC-003-E01
版 本 号: 01
工序: 脐带MSC原代细胞培养 记录编号  
细胞批号   日期  
试剂 名称 生产厂家 批号 使用数量
磷酸盐缓冲液(PBS)      
MSC培养基      
青/链霉素(双抗)      
75%酒精      
仪器
设备
生物安全柜:  XW015  XW022  其他  
离心机:  XW016  XW026  其他  
脐带组织处理
及干细胞
原代培养

1. 组织来源: 接收的脐带物料编码 . 采集时间:  24h内  超过24h; 入库编码:  ;

2. 将脐带组织转移至不锈钢碗中;

3. 手术剪裁断脐带, 弃掉结扎部分, 截下一小段留样, 其余部分用清洗液漂洗  次;

4. 取采集瓶中保存液10mL存于4℃冰箱留样, 留样标签应注明脐带条码, 样本类型, 操作人, 操作日期等;

5. 将脐带在不锈钢碗内, 用清洗液漂洗  次, 清洗液无明显血色后, 转入培养皿;

6. 用手术剪将脐带分成2~3cm的小段, 共计  段, 放入装有75%酒精的250mL离心瓶中浸泡30s后用清洗液冲洗干净.

7. 用组织镊将脐动脉和脐静脉内的血丝清理掉并洗净;

8. 由各段脐带组织剥取华通氏胶, 将剥好的华通氏胶放入一个盛有生理盐水的新培养皿内;

9. 用手术剪将华通氏胶剪成2~4mm3大小的组织块, 将剪碎的组织块使用清洗液重悬并200G*5min离心, 取上清存于4℃冰箱待检, 样本标签应注明脐带条码, 样本类型, 操作人, 操作日期等信息;

10. 离心后的组织沉淀共  mL, 接种  个T175, 每个T175培养瓶接种  mL, 接种完成后补加  mL原代细胞培养液.

11. 培养瓶上标记相关信息, 包括细胞来源、操作项目、操作时间、操作人等. 小心将培养瓶放入37℃, 5%CO2的培养箱中培养.

每个培养瓶上皆清楚标示细胞批号  是  否
清场 未使用完试剂是否放入指定位置  是  否
废液是否进行收集处理  是  否
是否清洁, 消毒操作间  是  否 是否清洁, 消毒生物安全柜与移液枪  是  否
备注  
操作人/日期: 复核人/日期: 主管/日期: