1. 显微镜下观察原代细胞, Day 细胞融合率达到90%以上, 进行重铺操作.

2. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用移液管轻轻吸出上清及组织  mL, 之后  是  否 将上清用于二次贴壁;

3. 吸取10mL生理盐水至培养瓶中, 润洗细胞生长面, 再吸弃上清, 重复一次;

4. 吸取2.5mL消化液至培养瓶中, 消化液铺满整瓶后, 在CO₂培养箱中消化1min, 待在显微镜下观察细胞消化彻底后, 每瓶加入终止消化液10mL终止消化;

5. 吸出液体收集于离心瓶中, 每瓶加入10mL生理盐水洗涤细胞瓶, 冲洗2次并将所有液体收集至同一离心瓶中, 用离心机300·g, 离心5分钟, 升9降9;

6. 倒掉上清, 盖上瓶盖, 轻弹瓶底重悬细胞, 洗管3次, 定容1个50mL离心管, 每管  mL;

7. 充分混匀后, 计数 *10⁶/mL, 共计数量为  *10⁷个, 接种  个T175培养瓶, 每瓶120万个细胞;

8. 充分晃匀后做好重铺P1标记, 放入CO₂培养箱进行继续培养.