1. 显微镜下细胞综合融合率达到90%以上, 进行传代操作, 此次共处理  瓶细胞;

2. 使用移液管轻轻吸出上清共  mL于离心管中作为终止消化液; 其余上清共  mL, 用作因子回收, 做好标记并放入-80℃冰箱;

3. 吸取10mL生理盐水至培养瓶中, 润洗细胞生长面, 再吸弃上清, 重复一次;

4. 每瓶加入2.5mL消化液, 消化液铺满整瓶后, 在CO₂培养箱中消化1min, 待在显微镜下观察细胞消化彻底后, 每瓶加入终止消化液10mL终止消化;

5. 吸出液体收集于离心瓶中, 每瓶加入10mL生理盐水洗涤细胞瓶, 冲洗2次并将所有液体收集至同一离心瓶中, 用离心机400·g, 离心5分钟, 升9降9;

6. 共收获  50mL  250mL 离心瓶细胞 瓶, 倒掉上清, 盖上瓶盖, 轻弹瓶底重悬细胞, 合管细胞, 并重悬, 洗管  次, 预估数量后定容  个50mL离心管, 每管  mL;

7. 充分混匀后, 计数 *10⁶/mL, 共计数量为  *10⁷个, 分出接种传代细胞  mL, 冻存细胞  mL; 接种  个T175培养瓶, 每瓶140万个细胞, 冻存细胞  *10⁷个,  管;

8. 配平后, 用离心机400·g, 离心5分钟, 升9降9;

9. 接种的细胞弃掉上清后, 用MSC完全培养基重悬定容至  mL, 每个培养瓶接种  mL, 加入培养基  mL.