-- 种子数据: SOP-SC-005-E01-01 SOP-SC-005-E01-01 人脐带间充质干细胞原代重铺操作记录 -- 源文件: docs/sop-templates/SOP-SC-005-E01-01.html UPDATE `biz_process` SET `sop_content` = '
logo 人脐带间充质干细胞原代重铺操作记录 文件编码: SOP-SC-005-E01
版 本 号: 01
工序: 脐带MSC原代重铺操作 记录编号  
细胞批号   日期  
试剂 名称 生产厂家 批号 使用数量
磷酸盐缓冲液(PBS)      
MSC完全培养基      
胰酶      
生理盐水      
消化液 ------ 制定配制记录  
仪器
设备
生物安全柜:  XW015  XW022  其他  
离心机:  XW016  XW026  其他  
干细胞原代
培养(重铺)

1. 显微镜下观察原代细胞, Day 细胞融合率达到90%以上, 进行重铺操作.

2. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用移液管轻轻吸出上清及组织  mL, 之后  是  否 将上清用于二次贴壁;

3. 吸取10mL生理盐水至培养瓶中, 润洗细胞生长面, 再吸弃上清, 重复一次;

4. 吸取2.5mL消化液至培养瓶中, 消化液铺满整瓶后, 在CO2培养箱中消化1min, 待在显微镜下观察细胞消化彻底后, 每瓶加入终止消化液10mL终止消化;

5. 吸出液体收集于离心瓶中, 每瓶加入10mL生理盐水洗涤细胞瓶, 冲洗2次并将所有液体收集至同一离心瓶中, 用离心机300·g, 离心5分钟, 升9降9;

6. 倒掉上清, 盖上瓶盖, 轻弹瓶底重悬细胞, 洗管3次, 定容1个50mL离心管, 每管  mL;

7. 充分混匀后, 计数 *106/mL, 共计数量为  *107个, 接种  个T175培养瓶, 每瓶120万个细胞;

8. 充分晃匀后做好重铺P1标记, 放入CO2培养箱进行继续培养.
每个培养瓶上皆清楚标示细胞批号  是  否
清场 未使用完试剂是否放入指定位置  是  否
废液是否进行收集处理  是  否
是否清洁, 消毒操作间  是  否 是否清洁, 消毒生物安全柜与移液枪  是  否
备注  
操作人/日期: 复核人/日期: 生产主管/日期:
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