-- 种子数据: SOP-SC-007-E01-01 SOP-SC-007-E01-01 人脐带间充质干细胞传代培养操作记录 -- 源文件: docs/sop-templates/SOP-SC-007-E01-01.html UPDATE `biz_process` SET `sop_content` = '
logo 人脐带间充质干细胞传代培养操作记录 文件编码: SOP-SC-007-E01
版 本 号: 01
工序: 脐带MSC传代操作 记录编号  
细胞批号   日期  
试剂 名称 生产厂家 批号 使用数量
磷酸盐缓冲液(PBS)      
MSC完全培养基      
生理盐水      
胰酶      
消化液 ------ 制定配制记录  
仪器
设备
生物安全柜:  XW015  XW022  其他  
离心机:  XW016  XW026  其他  
人脐带间充质
干细胞
传代操作

1. 显微镜下细胞综合融合率达到90%以上, 进行传代操作, 此次共处理  瓶细胞;

2. 使用移液管轻轻吸出上清共  mL于离心管中作为终止消化液; 其余上清共  mL, 用作因子回收, 做好标记并放入-80℃冰箱;

3. 吸取10mL生理盐水至培养瓶中, 润洗细胞生长面, 再吸弃上清, 重复一次;

4. 每瓶加入2.5mL消化液, 消化液铺满整瓶后, 在CO2培养箱中消化1min, 待在显微镜下观察细胞消化彻底后, 每瓶加入终止消化液10mL终止消化;

5. 吸出液体收集于离心瓶中, 每瓶加入10mL生理盐水洗涤细胞瓶, 冲洗2次并将所有液体收集至同一离心瓶中, 用离心机400·g, 离心5分钟, 升9降9;

6. 共收获  50mL  250mL 离心瓶细胞 瓶, 倒掉上清, 盖上瓶盖, 轻弹瓶底重悬细胞, 合管细胞, 并重悬, 洗管  次, 预估数量后定容  个50mL离心管, 每管  mL;

7. 充分混匀后, 计数 *106/mL, 共计数量为  *107个, 分出接种传代细胞  mL, 冻存细胞  mL; 接种  个T175培养瓶, 每瓶140万个细胞, 冻存细胞  *107个,  管;

8. 配平后, 用离心机400·g, 离心5分钟, 升9降9;

9. 接种的细胞弃掉上清后, 用MSC完全培养基重悬定容至  mL, 每个培养瓶接种  mL, 加入培养基  mL.

每个培养瓶上皆清楚标示细胞批号  是  否
清场 未使用完试剂是否放入指定位置  是  否
废液是否进行收集处理  是  否
是否清洁, 消毒操作间  是  否 是否清洁, 消毒生物安全柜与移液枪  是  否
备注  
操作人/日期: 复核人/日期: 生产主管/日期:
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