1. 原代培养48h内, 观察细胞  已经  还未 爬出, 进行补液;

2. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用10mL移液管轻轻加入  mL, 将体系补至30mL;

3. 静置细胞7天;

4. Day 观察细胞  已经  还未 爬出, 进行半换液;

5. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用10mL移液管轻轻吸弃上清  mL, 再加入等量体积的MSC完全培养基;

6. Day 观察细胞  已经  还未 爬出, 进行半换液;

7. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用10mL移液管轻轻吸弃上清  mL, 再加入等量体积的MSC完全培养基;

8. Day 观察细胞  已经  还未 爬出, 进行半换液;

9. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用10mL移液管轻轻吸弃上清  mL, 再加入等量体积的MSC完全培养基;

10. Day 观察细胞  已经  还未 爬出, 进行半换液;

11. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用10mL移液管轻轻吸弃上清  mL, 再加入等量体积的MSC完全培养基;

12. Day 观察细胞  已经  还未 爬出, 进行半换液;

13. 在培养瓶表面喷洒酒精后, 用无尘布擦拭放入生物安全柜中, 打开瓶盖, 使用10mL移液管轻轻吸弃上清  mL, 再加入等量体积的MSC完全培养基;

14. Day 观察到爬出的细胞局部融合度达到80%-90%, 准备进行重铺.